Los análisis de transferencia Northern para p21, Acetato de trembolona, ciclina D1 y miogenina se realizaron como se Acetato de trembolona anteriormente (13). En resumen, se fraccionaron 15-20 μg de ARN total en un gel de agarosa desnaturalizante al 1 (1 × MOPS, formaldehído al 6,7) y luego se transfirieron a una membrana de nailon por acción capilar. Todas las sondas para el análisis de transferencia Northern se realizaron mediante cebado aleatorio como se informó anteriormente (13). Luego, las membranas se visualizaron mediante autorradiografía (80 ° C, 3-40 h) y se cuantificaron mediante barrido de densitometría (Scion Image, Frederick, MD), obteniendo una densidad óptica integrada (IOD) que se utilizó para calcular IOD mRNA por Enantato de trembolona de total ARN. Aislamiento de ARN total y síntesis de ADNc. El ARN total se aisló con reactivo TRIzol (Life Technologies, Grand Island, NY) según las Acetato de trembolona del fabricante. El ADNc se transcribió de forma inversa a partir de 4 μg de ARN total con 1 μl de hexámeros aleatorios y 50 U de Superscript II RT (Invitrogen) en un volumen final de 20 μl a 25 ° C durante 10 min, seguido de 42 ° C durante 50 min y 70 ° C durante 15 min. PCR semicuantitativa. La amplificación por PCR se realizó con cebadores para MyoD e IGF-I como se describió previamente (35). Para la sonda MyoD, se utilizaron los siguientes oligonucleótidos: sentido 5'-CCCGACGGCTCTCTCTGCTCCTT-3 ', antisentido 5'-cgcctgggcctgggtgca-3'.